嶋田 透

Following baculovirus infection, the level of host messenger RNA (mRNA) declines and the synthesis of host proteins is shutoff in virus-infected cells. To comprehensively understand the regulation of host gene expression by Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV), we took a complementary DNA (cDNA) subtraction approach. Northern blot analysis was then performed to confirm whether obtained clones are differentially expressed. From these analyses, we obtained 4 down-, 7 up- and 2 non-regulated host gene candidates during the early stage of infection. Sequence analyses showed that these may encode proteins involved in transcription, cell cycle, cell adhesion, protein degradation, apoptosis or energy metabolism. We then measured the ADP/ATP ratio to address the response of host energy metabolism upon baculovirus infection. The ADP/ATP ratio showed cell death-like rapid increase following BmNPV infection with a transient decrease during 12-24 h post-infection (p.i.). Taken together, our results suggest that general events in host cells are controlled at the level of mRNA expression by BmNPV infection.

これまでにW染色体上にはW-Kabuki, W-KamikazeならびにW-Samuraiと称する3種類のRAPDが得られている。これらのうちW-Kabuki RAPDについては, その配列を含むBACクローンが得られており, そこを起点にcontigが進んでいる。W染色体の解析をさらに進めるためには, 起点となるDNAマーカーを増やす必要がある。そこで本研究では, まず, 新たに合成した500種類の10-merの任意配列プライマーを用い, W染色体上のRAPDの探索を行った。その結果, 1種類のW染色体特異的RAPDが得られた。またW染色体には多くのレトロトランスポゾンが入れ子状態で存在することから, 各種レトロトランスポゾンの配列を含むPCR用プライマーを作製し, 新たなマーカーの探索を行った。その結果, レトロトランスポゾンKabukiとBMC1の配列を含むプライマーの組み合わせにより, 新たなDNAマーカーが得られた。なお, これら2種類のW染色体特異的DNAマーカーは, 限性ゼブラのW染色体上にも存在していたが, 雌決定遺伝子が欠落したW染色体上には存在していなかった。これらのことから, 2種類のDNAマーカーは, 雌決定遺伝子に比較的近い位置に存在するものと考えられた。